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本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人分泌型磷脂酶A2(sPLA2)水平。用純化的人分泌型磷脂酶A2(sPLA2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人分泌型磷脂酶A2(sPLA2)，再與HRP標(biāo)記的人分泌型磷脂酶A2(sPLA2)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人分泌型磷脂酶A2(sPLA2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人分泌型磷脂酶A2(sPLA2)濃度。


標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3辣根化物酶的（HRP）活性。

自備物品：
1.酶標(biāo)儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
操作程序：
所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。
1、按前面說明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、0 值孔、空白孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL，0 值孔加樣本稀釋液 50μL，空白孔不加，樣本孔加待測樣本 50μL。
3、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔、0 值孔和樣本孔，加入辣根化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL。
4、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育 60min。
5、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20S，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù) 5 次。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡30s 的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。
6、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育 15min。
7、所有孔加入終止液 50μL，在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度（OD 值）。
試劑盒限制性：
1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。
天津越騰生物技術(shù)有限公司（Tianjin Yueteng Biotechnology Co., Ltd）是一家，集“產(chǎn)品研發(fā)、市場銷售、技術(shù)服務(wù)”為一體的生物學(xué)試劑及試劑盒的生物公司，公司擁有一批業(yè)的研發(fā)人員，我們注于生物產(chǎn)品的不斷完善和創(chuàng)新。產(chǎn)品覆蓋面廣，品質(zhì)可靠。先后開發(fā)了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等域的多種試劑及試劑盒。同時，越騰生物提供各種常規(guī)生化試劑，庫存常備產(chǎn)品多達(dá)10000多種，可隨時為廣大科研工作者提供各類業(yè)試劑。我們的企業(yè)文化是為科研事業(yè)貢獻(xiàn)綿薄之力!公司的核心價值是誠信為本，為客戶提供高品質(zhì)的產(chǎn)品、為員工提供發(fā)展平臺、為社會創(chuàng)造更多價值。