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本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中植物焦磷酸酶(IP)水平。用純化的植物焦磷酸酶(IP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物焦磷酸酶(IP)，再與HRP標(biāo)記的植物焦磷酸酶(IP)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物焦磷酸酶(IP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中植物焦磷酸酶(IP)濃度。

樣品的采集和儲存
以下只是列出樣品采集和保存的一般指南。所有樣本采集保存過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細(xì)胞培養(yǎng)上清：4000rpm 條件下離心 20min，去除細(xì)胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。
2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm 條件下離心 20min，小心地分離出血清，保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。
3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在 4000rpm 條件下，離心 20 分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。樣本收集后，無法一次檢測完畢，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。
4、組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的 PBS(一般按 1: 9的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對應(yīng) 9 mL的 PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶劑)加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎或反復(fù)凍融。最后將勻漿液 5000×g 離心 5-10 分鐘，取上清檢測。
5、細(xì)胞提取液：貼壁細(xì)胞用冷的 PBS 輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g 離心 5 分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì) 胞可直接離心收集。收集的細(xì)胞用冷的 PBS 洗滌 3 次。每 1×106 個細(xì)胞中加入 150-200μLPBS 重懸并通過反復(fù)凍融使細(xì)胞破碎(若含量很低可減少 PBS 的體積)。將提取液于 1500×g 離心 10 分鐘，取上清檢測。
6、其他生物體液：1000×g 離心 20 分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測。

其他用品
1、酶標(biāo)儀（450nm）
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機(jī)
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml 量筒

操作步驟：
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。


產(chǎn)品特點(diǎn)
一、、靈敏、特異的抗體；
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型。
免責(zé)聲明 1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或小鼠體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。 2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。
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