植物焦磷酸酶(IP)ELISA試劑盒實驗原理及操作步驟
發(fā)表時間:2024-11-11
貨號:YT-P0219
英文簡稱:(IP)ELISA試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中植物焦磷酸酶(IP)含量。。
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植物焦磷酸酶(IP)ELISA試劑盒實驗原理 :
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物焦磷酸酶(IP)水平。用純化的植物焦磷酸酶(IP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入植物焦磷酸酶(IP),再與HRP標記的植物焦磷酸酶(IP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物焦磷酸酶(IP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中植物焦磷酸酶(IP)濃度。
植物焦磷酸酶(IP)ELISA試劑盒操作步驟:
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。